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| 產(chǎn)地 | 國產(chǎn) |
| 保存條件 | 詳見說明書 |
| 品牌 | 帛科 |
| 貨號 | BK-P96321 |
| 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
| 檢測方法 | PCR法 |
| CAS編號 | |
| 保質(zhì)期 | 詳見說明書 |
| 適應(yīng)物種 | 詳見說明書 |
| 檢測限 | |
| 數(shù)量 | 1000 |
| 包裝規(guī)格 | 50T |
| 標(biāo)記物 | |
| 純度 | % |
| 樣本 | |
| 應(yīng)用 | |
| 是否進(jìn)口 | 否 |
NS0 殘留 DNA 檢測試劑盒
(PCR-熒光探針法)
NS0 殘留DNA 檢測試劑盒是用于定量檢測各種生物制品及藥品的中間品、半成品和成 品中殘留的 NS0 宿主細(xì)胞殘留 DNA。
本試劑盒利用 Taqman 探針法，定量檢測樣本中NS0 殘留 DNA 。該方法具有速度快、 特異性高、 性能可靠且 檢測限可達(dá)到 fg 級別。
試劑盒組份：
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試劑 |
裝量 |
貯存條件 |
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NS0 control DNA |
40ul×1 管 |
-20oC |
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DNA dilution buffer |
6ml ×1 瓶 |
-20oC |
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2×Taqman master mix (+UNG/ROX) |
0.75ml ×2 管 |
-20oC |
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10×NS0 qPCR mix |
0.3ml ×1 管 |
-20oC |
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RNase-Free H2O |
1.5ml×1 管 |
-20oC |
規(guī)格 ：100 反應(yīng)
適用機(jī)型：
PRISM 7500 Real-Time PCR System (ABI)
StepOne Plus Real-Time PCR System (ABI)
LightCycler 480 (Roche)
AriaMX (Agilent Technologies)
CFX (BIO-RAD)
NS0 殘留 DNA 檢測試劑盒實(shí)驗(yàn)操作過程：
一、 NS0 DNA 定量參考品的稀釋及標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備
用試劑盒中提供的 DNA dilution buffer 將 NS0 control DNA 進(jìn)行梯度稀釋，稀釋濃度依 次為 300pg/ul 、30pg/ul 、3pg/ul 、300fg/ul 、30fg/ul 、 3fg/ul。具體操作如下： 1.將試劑盒中的 NS0 control DNA 和 DNA dilution buffer 置于冰上融化，待完全融化后，輕微振蕩混勻，簡短快速離心。
2.取 6 支干凈的 1.5ml 離心管，分別標(biāo)記為 SD1 ，SD2 ，SD3 ，SD4 ，SD5 ，SD6。
3 ，SD1 管中加入 198ul DNA dilution buffer，其余管中分別加入 180ul DNA dilution buffer。 4,取 2ul NS0 control DNA 加入 SD1 管中， 然后渦旋振蕩混勻 5- 10S 后短時(shí)快速離心 5S，渦 旋振蕩和快速離心各重復(fù) 3 次。
5,按表 2 依次進(jìn)行 6 次梯度稀釋操作，稀釋操作同步驟 4。
表 2. NS0 control DNA 的稀釋
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稀釋管 |
稀釋體積 |
濃度 |
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SD1 |
2ul NS0 control DNA+198ul DNA dilution buffer |
300 pg/ul |
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SD2 |
20ul SD1+180ul DNA dilution buffer |
30 pg/ul |
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SD3 |
20ul SD2+180ul DNA dilution buffer |
3 pg/ul |
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SD4 |
20ul SD3+180ul DNA dilution buffer |
300 fg/ul |
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SD5 |
20ul SD4+180ul DNA dilution buffer |
30 fg/ul |
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SD6 |
20ul SD5+180ul DNA dilution buffer |
3 fg/ul |
qPCR 結(jié)果分析(以 ABI 7500 為例)
1.在 Results 的 Amplification plot 面板中， 將 Threshold 設(shè)置為 0.05 ，點(diǎn)擊 Analyze，此時(shí)可 初步查看擴(kuò)增曲線的形態(tài)是否正常。
2.在 Results 的 Plate 面板中，將標(biāo)準(zhǔn)曲線孔的 Task 一欄設(shè)置為 Standard，并且在 Quantity 一欄分別賦值為 3000 、300 、30 、3 、0.3 、0.03 (含義為每孔的 DNA 量， 單位為 pg)， 并且 在相應(yīng) 的 Sample Name 一欄命名為 SD1 、SD2 、SD3 、SD4 、SD5 、SD6。
3.在 Results 的 Plate 面板中，將無模板對照 NTC 孔的 Task 一欄設(shè)置為 NTC，將陰性質(zhì)控NEG 孔、待測樣本孔、樣本 ERC 孔的 Task 一欄設(shè)置為 Unknown，并且在相應(yīng)的 Sample Name 一欄中命名為 NTC 、NEG 、S 、ERC ，之后點(diǎn)擊開始鍵。
4.在 Results 的 Standard Curve 面板中，可讀取標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率(Slope)、截距(Intercept)、R2
5.在 Results 的 Report 面板中， Mean Quantity 一欄可讀取無末班對照 NTC、陰性質(zhì)控 NEG、 待測樣本、樣本 ERC 的檢測值。后續(xù)可在檢測報(bào)告中將單位換算為 pg/ml 樣本。
注:根據(jù)待測樣本和樣本 ERC 的檢測結(jié)果計(jì)算加樣回收率，加樣回收率要求在 50%- 150%之 間。
