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| 產(chǎn)地 | 進(jìn)口、國產(chǎn) |
| 品牌 | 帛科 |
| 貨號 | BK-P64733 |
| 用途 | 公司產(chǎn)品僅用于科研 |
| 包裝規(guī)格 | 50次 |
| 純度 | % |
| CAS編號 | |
| 是否進(jìn)口 | 是 |
本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。
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產(chǎn)品名稱 |
規(guī)格 |
貨號 |
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豬圓環(huán)病毒2型PCR試劑盒 |
50次 |
BK-P64733 |
實(shí)驗(yàn)方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix （2mM）
4 μl 引物1（10pM）
2 μl 引物2（10pM）
2 μl Taq酶 （2U/μl）
1 μl DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl 加ddH2O至 50 μl
PCR實(shí)驗(yàn)步驟：
①取凍存已裂解的細(xì)胞，室溫放置5分鐘使其完全溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀。混勻后，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí)，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其完全溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后，讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液
濃度和純度。
使用方法：
一、樣品采集：
1、食品樣品：樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照菌檢驗(yàn)要求進(jìn)行。
2、血液樣品：用無菌注射器抽取受檢者血2mL，注入無菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管，立即混勻。
3、糞便樣品：取糞便置于滅菌的收集管中送檢。
4、病灶部位樣品：取部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。
一、稀釋 PCR 陽性對照（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例）
1. 注意：由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的 DNA 片段作為陽性對照。
2. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。
4. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩 1 分鐘，得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用
6. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
CD14 Others Human 人 CD14 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) Cupricoxide氧化銅250克AR，99%
小鼠小腸內(nèi)皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL流醋亞鈰 CqRIUM TITcNIUM FLUORIDq 10420-29-6
Pig MSC豬*間質(zhì)干細(xì)胞 Pig MSC of porcine bone marrow mesenchymal stem cells DMEM低糖+10% FBS+glutamin1000ul盒裝無菌帶濾芯吸頭shēng huà shì jì容量：保存：-20℃500U
IL6 Protein Rat 重組大鼠 IL6 / Ierleukin-6 蛋白L-TYROSINEL-酪酸美國藥典級500G60-18-4RT
RM1(大鼠肌肉成纖維樣細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 PC-12未分化(大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤)(ABA)
小鼠小腸隱窩上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mLxy7noXYetxylCELLULOSE纖維素*米白色至黃色粉末RTsigma
Hepa 1-6小鼠細(xì)胞 Hepa mouse hepatoma cell line 1-6 DMEM+10%FBS溴酚綠;溴酚藍(lán);四溴間酚磺酞 BroMocrqsol grqqn;BroMocrqsol grqqn wo7ium sclt;3,3′,5,5′-TqtrcbroMo-M-crqsol sulfoncphthclqin 76-60-8
IL6 Protein Mouse 重組小鼠 IL6 / Ierleukin-6 蛋白酸性品紅 Acid Fuchsin (Dye content, Approx.70%) 3244-88-0 25G 染色劑
Romas(瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 WI-38(二倍體胚肺細(xì)胞)間甲基環(huán)，英文名或英文縮寫：3-metxylcyclohexanol，級別：GR，99.8%，規(guī)格：100克
CL-0124IMR-32(神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2MSMedium 10L/50L Sigma M5524
魚源細(xì)胞地奈德標(biāo)記13C3Desonide - Labeled 13C3質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口
DPP4 Others Human DPPIV / DPP4 / CD26 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) L-順式-鹽酸地爾硫卓L-cis-Diltiazem ? HCl質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口
豬圓環(huán)病毒2型PCR試劑盒卵巢表層上皮細(xì)胞HOSEpiC地爾硫卓Diltiazem質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口
PVRL1 Others Rat 大鼠 CD111 / Nectin-1 / PVRL1 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 去乙酰地爾硫卓-d3Desacetyl Diltiazem-d3質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口
大鼠腸平滑肌細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mLO-去甲基地爾硫卓O-Desmethyl Diltiazem質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口
A549, 人細(xì)胞系二氫維生素K1Dihydrovitamin
K1質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口
人卵巢腺癌細(xì)胞;SK-OV-3 大鼠肺微內(nèi)皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL西司他丁Cilastatin質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口
人外膜成纖維細(xì)胞HBVSMC西司他丁鈉Cilastatin 質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口
EFNA4 Others Human 人 Ephrin-A4 / EFNA4 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 奧卡西平1醇-硫酸Oxcarbazepine Enol-sulfate質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口
貓腎細(xì)胞;CRFK奧卡西平-D4(主要的)Oxcarbazepine-D4 (Major)質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：
1）RT-PCR可以檢測組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實(shí)驗(yàn)前請充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR（quantitative
real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號積累實(shí)時(shí)監(jiān)測整個(gè)PCR進(jìn)程，*通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括*定量和相對定量）和定性分析。
主要服務(wù)：DNA或RNA的*定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù)：引物設(shè)計(jì)、RNA提取、cDNA合成、qPCR
