產(chǎn)地 | 進口、國產(chǎn) |
品牌 | 帛科 |
貨號 | BKP3958 |
用途 | 公司產(chǎn)品僅用物科研 |
包裝規(guī)格 | 50次 |
純度 | % |
CAS編號 | |
是否進口 | 是 |
技術(shù)服務(wù)內(nèi)容:
實驗步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳,以軟件分析電泳條帶的灰度值(IOD值),通過與內(nèi)參基因的灰度值比較,判斷目的mRNA的相對表達量。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
犬巨球菌PCR檢測試劑盒說明書 | Macrococcus canisPCR | BKP3958 |
PCR實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4:PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μ進行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
特點優(yōu)勢:
1. 特異性:犬巨球菌PCR檢測試劑盒說明書使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析,經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對,確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段,可實現(xiàn)對細菌種屬及血清型的特異檢測,特異性均達到100%。
2. 重現(xiàn)性:該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實驗菌株的驗證,重現(xiàn)性為100%。
3. 靈敏性:該系列產(chǎn)品可實現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測,當樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時,可實現(xiàn)對其的直接檢測,無需繁瑣的增菌過程。
4. 實用性:檢測范圍廣,涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種及腸道致病菌,可實現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測,整個檢測過程為3-4個小時。
5. 優(yōu)勢1:序列資源豐富,除GenBank公布的序列外,公司還進行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6. 優(yōu)勢2:該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實驗驗證,憑借公司擁有的豐富的菌種資源,每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標準菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標準菌株和臨床菌株的特異性驗證,確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)*個堿基,應(yīng)嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。
T-109A彈性蛋白酶(含10mL酶解緩沖液)1mL無水錄化銅shēng huà shì jì容量:100毫克
SK-N-SH, 人神經(jīng)母細胞瘤細胞 低轉(zhuǎn)移細胞,96-C細胞 PLC/PRF/5(亞力山大細胞) 2-Bromo-2-mqthylpropcnq 207-19-7
小鼠細胞;Fox-NY堿式,英文名或英文縮寫:Lead(II)acetate basic,級別:CP,98.5%,規(guī)格:5克
PCSK9 Others Mouse 小鼠 PCSK9 / NARC1 人細胞裂解液 (陽性對照) 酸性氧化鋁shēng huà shì jì容量:100毫克
大鼠胸大動脈平滑肌細胞;A7r55486-55-52,6-二甲氧基2,6-Dimetxoxy
HMGB1 Others Human 人 HMGB1 / HMG1 人細胞裂解液 (陽性對照) 血紅素(>95%,BR)Hematin質(zhì)量規(guī)格:>95%,BR
敘利亞倉鼠皮膚細胞;GH-S1聚乙二醇800PEG 800質(zhì)量規(guī)格:BR
OPTN Others Human 人 Optineurin / OPTN 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 炔雌;炔雌醇環(huán)戊Quinestrol質(zhì)量規(guī)格:USP
卵巢微內(nèi)皮細胞Many types of cells包裝:5 × 105方(1ml)1酸二酯酶 (比活度:>20 U/mg,BC)Phosphodiesterase I from Crotalus adamanteus Venom質(zhì)量規(guī)格:比活度:>20 U/mg,BC
人臍平滑肌細胞 人胚肺細胞,NCI-H1563[H1563]細胞 MLTC-1(間質(zhì)細胞瘤細胞)化丙啶(>95% (HPLC),BC)Propidium iodide質(zhì)量規(guī)格:>95% (HPLC),BC
犬巨球菌PCR檢測試劑盒說明書HA Others H9N2 甲型 H9N2 (A/Hong Kong/1073/99) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細胞裂解液 (陽性對照) 6α-羥基紫杉醇6α-Hydroxy Paclitaxel質(zhì)量規(guī)格:美國進口
人惡性多發(fā)性;ERA-2α-腺苷α-Adenosine 質(zhì)量規(guī)格:美國進口
Spike Others Human coronavirus 人 spike glycoprotein (aa 1-760) 人細胞裂解液 (陽性對照) 腺苷 3’-單1酸鈉鹽Adenosine 3'-monophosphate salt 質(zhì)量規(guī)格:美國進口
FaDu 人咽鱗癌細胞腺苷 3',5'-二1酸鈉鹽Adenosine 3',5'-diphosphate salt 質(zhì)量規(guī)格:美國進口
Caco-2人結(jié)直腸腺癌細胞 Caco-2 human colorectal adenocarcinoma cells MEM+20% FBS腺苷 2',5'-二1酸鈉鹽Adenosine 2',5'-diphosphate salt 質(zhì)量規(guī)格:美國進口
腦動脈內(nèi)皮細胞Many types of cells包裝:5 × 105方(1ml)wo7iumBORATEBUFFER硼酸鈉緩沖液超級白色精細結(jié)晶粉末RTsigma
AIM2 Others Human 人 AIM2 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 3-肖基本安(易制暴) 3-nitnocnilinq 1999-9-
小鼠細胞(分泌促生長激素分泌激素);AtT-20谷草轉(zhuǎn)酶測試盒10個
293T/17[HEK 293T/17]細胞,人胚腎細胞 人膽管細胞型細胞,HCCC-9810細胞 CL-0160Molt-4(人急性母細胞細胞)5×106cells/瓶×2wo7iumACETATE,2MSOLUTION,pH4.2醋酸鈉溶液生物技術(shù)級透明無色液體RTsigma
倉鼠卵巢細胞;Lec1922-67-8酸metxyl propiolate