產(chǎn)地 | 進口、國產(chǎn) |
品牌 | 帛科 |
貨號 | BKP4031 |
用途 | 公司產(chǎn)品僅用物科研 |
包裝規(guī)格 | 50次 |
純度 | % |
CAS編號 | |
是否進口 | 是 |
PCR實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結束反應,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4:PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μ進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
瑪爾摩分枝桿菌PCR檢測試劑盒供應 | Mycobacterium malmoenesPCR | BKP4031 |
技術服務內容:
實驗步驟包括RNA提取、反轉錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳,以軟件分析電泳條帶的灰度值(IOD值),通過與內參基因的灰度值比較,判斷目的mRNA的相對表達量。
特點優(yōu)勢:
1. 特異性:瑪爾摩分枝桿菌PCR檢測試劑盒供應使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學分析,經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對,確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段,可實現(xiàn)對細菌種屬及血清型的特異檢測,特異性均達到100%。
2. 重現(xiàn)性:該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實驗菌株的驗證,重現(xiàn)性為100%。
3. 靈敏性:該系列產(chǎn)品可實現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測,當樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時,可實現(xiàn)對其的直接檢測,無需繁瑣的增菌過程。
4. 實用性:檢測范圍廣,涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種及腸道致病菌,可實現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測,整個檢測過程為3-4個小時。
5. 優(yōu)勢1:序列資源豐富,除GenBank公布的序列外,公司還進行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6. 優(yōu)勢2:該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實驗驗證,憑借公司擁有的豐富的菌種資源,每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標準菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標準菌株和臨床菌株的特異性驗證,確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結果。本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
DDR1 Others Human 人 DDR1 Kinase / MCK10 / CD167 人細胞裂解液 (陽性對照) DL-Malicacid蘋果酸1毫克CP,99%
非洲綠猴腎細胞系/HCV-NS2;Vero-HCV-NS2固綠 FCF brillicnt bluq G 323-42-9
IL4 Others Mouse 小鼠 IL4 / Ierleukin-4 (Q136D,Y139D) 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 羅丹明 B Rhodamine B (Dye content, ≥95%) 81-88-9 25G 染色劑
心肌細胞Many types of cells包裝:5 ×105方(1ml)Cyclooctane環(huán)辛酮25克BR,97%
獼猴肌肉細胞;MMm7 人細胞,HT-29細胞 Bcap-37(癌細胞)(蛋酸))
EB病毒轉化的人B細胞;KMY0920鹽酸洛美沙星Lomefloxacin HCl質量規(guī)格:>98.5%,BR
293FT細胞,表達SV40T抗原人胚腎上皮細胞 大鼠肝細胞瘤,H4-II-E-C3細胞 CL-0324BT-20(人癌細胞)5×106cells/瓶×2鹽酸洛美沙星(標準品)Lomefloxacin HCl質量規(guī)格:含量測定
BC-009(人癌細胞) 5×106cells/瓶×2氯替潑諾Loteprednol Etabonate質量規(guī)格:>99.0%
HTEpC-c 人類氣管上皮細胞(HTEpC) 500,000cells 人平滑肌細胞HBVSMC氯替潑諾(標準品)Loteprednol Etabonate質量規(guī)格:HPLC>99.0%,標準品
原代內皮細胞培養(yǎng)特制添加劑Many types of cells包裝:5/2.5/1ml洛伐他汀Lovastatin,Monacolin K質量規(guī)格:>99%,BR,可用于細胞培養(yǎng)
瑪爾摩分枝桿菌PCR檢測試劑盒供應人胎盤絨毛膜細胞完全培養(yǎng)基 100mLN-氧基奧氮平Olanzapine N-Oxide質量規(guī)格:美國進口
MA-891細胞,小鼠癌高轉移細胞 L929(成纖維細胞) 人葡萄膜色素細胞;UM氨曲南Aztreonam質量規(guī)格:> 95%,BR
CCL7 Protein Human 重組人 MCP-3 / CCL7 蛋白 (His 標簽)氨曲南(標準品)Aztreonam質量規(guī)格:HPLC>95%,標準品
RH-35(大鼠細胞) 5×106cells/瓶×2 甲型 H7N8 (A/mallard/Netherlands/33/2006) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 巴卡丁 IIIBaccatin III質量規(guī)格:度> 98%,BR,可用于細胞培養(yǎng)
人肺轉化細胞;AE1201巴卡丁 III(標準品)Baccatin III質量規(guī)格:HPLC>98%,標準品
AGRP Others Mouse 小鼠 AGRP / AgRP 人細胞裂解液 (陽性對照) X-SA瓊脂培養(yǎng)基shēng huà shì jì容量:RT1把/包
MEG-01 人成巨核細胞細胞偶氮錄膦mN;2-(4-錄-2-膦醋基本偶氮)-7-(3-肖基本偶氮)-1,8-二羌基-3,6-二磺醋 Chlorophosphonczo MN 77320-04-0
MSTO-211H人細胞株 Human lung cancer cell line MSTO-211H RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS (50%) Glutaraldehyde solution (Grade I, 50% ... 10ML 通用試劑
MIF Protein Human 重組人 MIF / GLIF 蛋白 (His 標簽)L-天門冬酸鉀shēng huà shì jì容量:RT25克
人胚;WI-38 [WI38] 人成纖維細胞完全培養(yǎng)基 100mL(二硫代蘇糖醇)
反應五要素:
參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應的關鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內部出現(xiàn)二級結構,避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)*個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量產(chǎn)生所需要的結果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。