產(chǎn)地 | 進口、國產(chǎn) |
品牌 | 帛科 |
貨號 | BKP3712 |
用途 | 公司產(chǎn)品僅用物科研 |
包裝規(guī)格 | 50次 |
純度 | % |
CAS編號 | |
是否進口 | 是 |
PCR實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結束反應,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4:PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μ進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
禾谷鐮刀菌PCR檢測試劑盒價格 | Fusarium graminearumPCR | BKP3712 |
技術服務內容:
實驗步驟包括RNA提取、反轉錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳,以軟件分析電泳條帶的灰度值(IOD值),通過與內參基因的灰度值比較,判斷目的mRNA的相對表達量。
特點優(yōu)勢:
1. 特異性:禾谷鐮刀菌PCR檢測試劑盒價格使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學分析,經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對,確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段,可實現(xiàn)對細菌種屬及血清型的特異檢測,特異性均達到100%。
2. 重現(xiàn)性:該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實驗菌株的驗證,重現(xiàn)性為100%。
3. 靈敏性:該系列產(chǎn)品可實現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測,當樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時,可實現(xiàn)對其的直接檢測,無需繁瑣的增菌過程。
4. 實用性:檢測范圍廣,涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種及腸道致病菌,可實現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測,整個檢測過程為3-4個小時。
5. 優(yōu)勢1:序列資源豐富,除GenBank公布的序列外,公司還進行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6. 優(yōu)勢2:該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實驗驗證,憑借公司擁有的豐富的菌種資源,每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標準菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標準菌株和臨床菌株的特異性驗證,確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結果。本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
JAM3 Others Human 人 JAM3 / JAM-C 人細胞裂解液 (陽性對照) Glycogenfromoyster糖元二型1克超,98%
人上皮樣細胞;BEAS-2B;γ-丁內酯;4-羌基丁醋內酯 1,4-Butyrolcctonq;1,4-Butcnolidq;1,2-Butcnolidq;γ-xy7noxybutyric ccid lcctonq;4-xy7noxybutyric ccid-γ-lcctonq
HKC細胞,人胚腎上皮細胞 大鼠肺泡巨噬細胞,NR8383細胞 CL-0381MDA-MB-175VII(人導管癌細胞)5×106cells/瓶×22-典本加醋酯 Mqthyl 2-iodobqnzoctq 610-97-9
C918(人眼脈絡色素瘤細胞) 5×106cells/瓶×2肌醇5克RT
HWP-c visceral 人類白前脂肪細胞(HWP)內臟 500,000cells 人腸微內皮細胞HIMEC(多聚蛋白胨)
細胞名稱 種屬外消旋α-羥基布洛芬rac α-Hydroxy Ibuprofen質量規(guī)格:美國進口
REG4 Others Mouse 小鼠 REG4 / GISP / RELP 人細胞裂解液 (陽性對照) (R)-布洛芬(R)-Ibuprofen質量規(guī)格:美國進口
小鼠成纖維細胞(EGFP標記)(S)-布洛芬(S)-Ibuprofen質量規(guī)格:美國進口
ICAM2 Others Mouse 小鼠 ICAM-2 / CD102 人細胞裂解液 (陽性對照) 依那普利Enalapril質量規(guī)格:美國進口
人間充質干細胞-骨髓RNAHMSC-bm miRNA5 μg1,3-二芐基-5-氟尿嘧啶1,3-Dibenzyl-5-fluorouracil質量規(guī)格:美國進口
禾谷鐮刀菌PCR檢測試劑盒價格HSC-T6, 大鼠肝星狀細胞系3-磺炳基十六烷基二甲甜菜堿3-(N,N-Dimethylpalmitylammonio)propanesulfonate(SHDAB)質量規(guī)格:>98%,BR
EB病毒轉化的人B細胞(彝族);HYL 人腹膜內皮細胞完全培養(yǎng)基 100mLDBD-ED [=4-(N,N-二甲氨基磺酰)-7-(2-氨基乙基氨基)-2,1,3-苯并惡二唑]DBD-ED [=4-(N,N-Dimethylaminosulfonyl)-7-(2-aminoethylamino)-2,1,3-benzoxadiazole] 質量規(guī)格:用于高效液相色譜標記
牛腦垂體提取物BPEAABD-SH (=4-乙酰氨基-7--2,1,3-苯并惡二唑](>94.0%(HPLC))AABD-SH (=4-Acetamido-7-mercapto-2,1,3-benzoxadiazole) 質量規(guī)格:>94.0%(HPLC)
EPHB2 Others Mouse 小鼠 EphB2 / Hek5 人細胞裂解液 (陽性對照) 9-(溴甲基)丫啶(>98.0%(HPLC)(T))9-(Bromomethyl)acridine 質量規(guī)格:>98.0%(HPLC)(T)
人細胞;SF17DBD-COCl [=4-(N,N-二甲基氨磺酰)-7-(N-氯甲酰甲基-N-甲氨基)-2,1,3-苯并惡二唑](>98.0%(T))DBD-COCl [=4-(N,N-Dimethylaminosulfonyl)-7-(N-chloroformylmethyl-N-methylamino)-2,1,3-benzoxadiazole]質量規(guī)格:>98.0%(T)
CM-R034大鼠肝動脈內皮細胞完全培養(yǎng)基100mL1-氮雜-15-冠-5-(>98.0%(T))質量規(guī)格:>98.0%(T)1-Aza-15-crown 5-Ether
SGC-7901/VCR細胞,人耐VCR胃腺癌細胞 人神經(jīng)細胞,BT-325細胞 SV40轉化的非洲綠猴腎細胞;COS-71-氮雜-18-冠-6-(>98.0%(GC)(T))質量規(guī)格:>98.0%(GC)(T)1-Aza-18-crown 6-Ether
COS-7(非洲綠猴SV40轉化的腎細胞) 5×106cells/瓶×21-氮雜-12-冠4-(>98.0%(T))質量規(guī)格:>98.0%(T)1-Aza-12-crown 4-Ether
CA12 Others Human 人 CA12 人細胞裂解液 (陽性對照) 4'-乙酰苯并-15-冠-5-(>95.0%(GC))質量規(guī)格:>95.0%(GC)4'-Acetylbenzo-15-crown 5-Ether
人胎兒胸腺細胞株;HFT-8810 [HFT8810]1,3-二氨基胍鹽酸鹽 質量規(guī)格:>98%1,3-Diaminoguanidine Monohydrochloride
反應五要素:
參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應的關鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內部出現(xiàn)二級結構,避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)*個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量產(chǎn)生所需要的結果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。