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使用方法：
收到細(xì)胞HCT-8/VCR現(xiàn)貨供應(yīng)后，請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作。
1. 取出25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置6-8小時(shí)或者過夜，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2. 待細(xì)胞達(dá)到80%匯合時(shí)準(zhǔn)備進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
3. 細(xì)胞傳代
1) 吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞一次；
2) 添加0.125%胰蛋白酶消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中，37℃溫浴3min左右；倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后吸棄消化液，再加入完全培養(yǎng)液終止消化；
3) 用吸管輕輕吹打混勻，按1:2或1:3等適當(dāng)?shù)谋壤M(jìn)行接種傳代，然后補(bǔ)充新鮮的完全培養(yǎng)基至5mL，放入37℃，5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
4) 待細(xì)胞完全貼壁后，培養(yǎng)觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的完全培養(yǎng)基。

公司產(chǎn)品僅用于科研
中文名稱： HCT-8/VCR現(xiàn)貨供應(yīng)
簡(jiǎn)稱：人長(zhǎng)春新堿耐藥株

種屬：Human

來(lái)源：

培養(yǎng)基：培養(yǎng)基: RPMI-1640+10%HS+1%雙抗+700ng/ml 長(zhǎng)春新堿   消化液 0.25%胰蛋白酶+0.53mMol/L EDTA     培養(yǎng)條件 二氧化碳培養(yǎng)箱:溫度 37℃,5%的二氧化碳

狀態(tài)：客戶收到細(xì)胞后按照下面的要求操作：培養(yǎng)瓶里面的培養(yǎng)液是不含藥物的。待細(xì)胞長(zhǎng)到 70-80%的匯合度   時(shí)，去掉培養(yǎng)液，加入含 400ng/ml VCR 藥物的培養(yǎng)液，放入培養(yǎng)箱，這段時(shí)間肯定會(huì)有小部分細(xì)胞懸   浮起來(lái)，但是不要緊，通過換液可以去掉，

基本特性：
（ 1 ）組織來(lái)源于正常人肺組織。
（ 2 ）鑒定：肌動(dòng)蛋白， alpha-SMA 和 Desmin 免疫熒光染色。
（ 3 ）原代細(xì)胞培養(yǎng)末期液氮凍存。
（ 4 ）每?jī)龃婀芗?xì)胞數(shù)： 500000cells/1ml 。
（ 5 ）肌動(dòng)蛋白， alpha-SMA 和 Desmin 免疫熒光染色驗(yàn)證。
（ 6 ）不含有 HIV-1 、 HBV 、 HCV 、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。

操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。*天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。產(chǎn)品僅供科研使用
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

鎢粉10克  HumanfactorB,BFELISAKit人B因子(BF)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

53939-30-32-錄-5-溴5-Bromo-2-chloropyridine  人維生素B12(VB12)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

錄化銫shēng huà shì jì容量：500u  豬催乳素(PRL)免疫試劑盒 Pig prolactin,PRL ELISA Kit

2,4-二錄本醇 99% 2,4-Dichlorobqnzyl clcohol 1777-8-8  Humanbasicfibroblastgrowthfactor4,bFGF-4ELISAKit 人堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子4(bFGF-4)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

氧化型輔酶Ⅰshēng huà shì jì容量：100克  Humannonsmallcelllungcancer/LungtumorAigen,LTAELISA試劑盒人非小細(xì)胞抗原(LTA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
蘋果酸脫氫酶測(cè)試盒(測(cè)組織)shēng huà shì jì容量：100支/包  人細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶2(ERK2)Elisa試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

33864-99-2阿利新藍(lán)Ingrain Blue 1  豬肌紅蛋白(MB)免疫試劑盒 Pig Myoglobin,MB ELISA kit

L-蘋果酸5克RT  HumaegulatedonactivationinnormalT-cellexpressedandsecreted,RAESELISAkit 人正常T細(xì)胞表達(dá)和分泌因子(RAES/CCL5)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

四乙酸三鈉 EDTA,3Na,≥98.0% 150-38-9 25G 通用試劑  Humanmyelinbasicproteinaoaibody,MBPELISA試劑盒人髓鞘堿性蛋白抗體(MBP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

L-天冬安醋;L-天冬醋;L(+)天門冬安醋;L(+)安基丁二醋;L(+)安基琥珀醋 L-cspcrtic ccid;L-cspcrcginic ccid;L-cMinobutcnqdioic ccid;L-cMinosuccinic ccid 26-84-8  組織脂肪酸合成酶(fattyacidsyhase)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒20次
堿性嶙酸酶100克  HumanBullousPemphigoid,BPELISAKit人大皰性類天皰瘡抗體(BP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

(牛肉粉)  人鳥酸脫羧酶(ODC)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

普鈣，英文名或英文縮寫：Calcium hypophosphite monohydrate，級(jí)別：CP，99%，規(guī)格：10毫克  小鼠網(wǎng)膜素(omein)免疫試劑盒 Mouse omein ELISA Kit

銨 cmmonium, Qucnt Tqst Strips  轉(zhuǎn)基因植物35S基因核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T

3-羥基-L-酪酸，英文名或英文縮寫：L-Dopa，級(jí)別：BR，98%，規(guī)格：5克  humansolubleclusterofdiffereiation28,sCD28ELISA試劑盒人可溶性CD28(sCD28)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
HCT-8/VCR現(xiàn)貨供應(yīng)蛋白保護(hù)劑TY，英文名或英文縮寫：Protein protectant TY，級(jí)別：生物技術(shù)級(jí)，200u/mg，規(guī)格：1克  CLIAKitforBigET(MouseBigEndothelin)ELISAKit小鼠大內(nèi)皮素規(guī)格：48T/96T

115-10-6Dimetxyl  細(xì)素酶(UREASE)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒20次

Hmpe六嶙胺25克高純，98%  Rabbitlipoproteinα,Lp-αELSIAKit兔脂蛋白α(Lp-α)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

3,4-二基二本同 3,4-Dimqthylbqnzophqnonq 271-39-3  豚鼠內(nèi)皮型合成酶(eNOS)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

Glycogen糖元1KU高純，98%  Human inhibitor of apoptosis (IAP) ELISA Kit 人細(xì)胞凋亡抑制因子(IAP)ELISA試劑盒

實(shí)驗(yàn)操作：
1、培養(yǎng)瓶預(yù)包被。試驗(yàn)前一天預(yù)包培養(yǎng)瓶，置于超靜臺(tái)吹干或45℃烘箱烘干（切記保持無(wú)菌），4℃冰箱放置，備用。
2、取材：正常成年大鼠腹腔注射5%苯巴比妥，75%酒精浸泡，無(wú)菌條件下迅速取出大鼠主動(dòng)脈。
3、材料預(yù)處理：將獲取的放入含有1% P/S的1 × PBS （pH 7.4 ）中反復(fù)洗滌，去除外部的血漬，洗滌液澄清，用無(wú)菌鑷子剝?nèi)ネ饽っ娴臍埩艚M織。PBS洗滌凈。
4、除去內(nèi)皮細(xì)胞：將縱向剪開， 內(nèi)膜面向上，無(wú)菌鑷子沿中軸方向反復(fù)刮動(dòng)內(nèi)膜層4-5遍，去掉內(nèi)皮細(xì)胞，用1 × PBS （pH 7.4 ）洗滌3次。
5、分離中膜：將去掉內(nèi)膜的，繼續(xù)刮動(dòng)分離中膜，去掉外膜，用眼科剪將內(nèi)膜剪碎為1×1mm3的小塊，加入1 × PBS （pH 7.4 ），轉(zhuǎn)移到15ml 離心管中，PBS洗滌3次，離心收集沉淀物。
6、消化：在洗凈的內(nèi)膜碎塊中加入消化酶液，將離心管放入37℃水浴消化15min。
7、終止消化：吸出消化液入新的離心管中，按1：1加入消化終止液，中止酶反應(yīng)；余下的組織繼續(xù)加入消化液，消化15min ，重復(fù)消化3次。
8、收集重懸細(xì)胞：收集中止后的消化液于離心管中，1000 rpm，離心10 min，棄去上清，加入培養(yǎng)液重懸，染色計(jì)數(shù)細(xì)胞。
9、培養(yǎng)細(xì)胞密度：調(diào)整細(xì)胞密度以5 × 105個(gè)/ml 接種入培養(yǎng)瓶。
10、培養(yǎng)：放置于37℃，5% CO2培養(yǎng)箱中。