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使用方法：
收到細胞成纖維細胞直銷后，請按照以下方法進行操作。
1. 取出25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5% CO2細胞培養(yǎng)箱中靜置6-8小時或者過夜，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
2. 待細胞達到80%匯合時準備進行傳代培養(yǎng)。
3. 細胞傳代
1) 吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細胞一次；
2) 添加0.125%胰蛋白酶消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中，37℃溫浴3min左右；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后吸棄消化液，再加入完全培養(yǎng)液終止消化；
3) 用吸管輕輕吹打混勻，按1:2或1:3等適當?shù)谋壤M行接種傳代，然后補充新鮮的完全培養(yǎng)基至5mL，放入37℃，5% CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
4) 待細胞完全貼壁后，培養(yǎng)觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的完全培養(yǎng)基。

公司產(chǎn)品僅用于科研
中文名稱： 成纖維細胞直銷
簡稱：成纖維細胞

種屬：

來源：

培養(yǎng)基：

狀態(tài)：

產(chǎn)品規(guī)格：

單位：

貨號：AE1265

基本特性：
（ 1 ）組織來源于正常人肺組織。
（ 2 ）鑒定：肌動蛋白， alpha-SMA 和 Desmin 免疫熒光染色。
（ 3 ）原代細胞培養(yǎng)末期液氮凍存。
（ 4 ）每凍存管細胞數(shù)： 500000cells/1ml 。
（ 5 ）肌動蛋白， alpha-SMA 和 Desmin 免疫熒光染色驗證。
（ 6 ）不含有 HIV-1 、 HBV 、 HCV 、支原體、細菌、酵母和真菌。

操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。*天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。產(chǎn)品僅供科研使用
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

鹽酸-S-芐基異shēng huà shì jì容量：500克  小鼠心肽(ANP)免疫試劑盒 Mouse Aial Naiuretic Peptide,ANP ELISA Kit

18635-45-52,3-二基輕臭鹽DL-2,3-DIAMINOPROPIONIC ACID xy7noBROMIDE  副溶血性弧菌(VP)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T

CALCIUMACETATE,MONOHYDRATE一水醋酸鈣500GRT  Humaudimealbovineserumalbumincheck-upELISA試劑盒人的牛血清白蛋白殘留檢測ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

鄰酰安基本酚 2-ccqtcmidophqnol 614-80-  vWF小鼠性因子/瑞斯托霉素輔因子規(guī)格：48T/96T

L-天冬酰胺10克  HumanCaveolin-1,Cav-1ELISAKit人窖蛋白(Cav-1)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
三扶乙醇，英文名或英文縮寫：TFEA，級別：CP，98%，規(guī)格：25克  HumanmajorhistocompatibilitycomplexⅡ,MHCⅡ/HLA-ⅡELISAKit人主要組織相容性復合體Ⅱ類(MHCⅡ/HLA-Ⅱ)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

NutrientBroth 100g/500g/北京250g BD 233000  人總膽固醇(TC)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

YEASTnitnOGENBASEW/OAMINO&AMM酵母氮源(YNB),不含基酸,不含細菌學級100GRT  Human oncostatin M (OSM) ELISA Kit 人抑瘤素M(OSM)ELISA試劑盒

滅瘟速S言醋鹽 ≥98.0% (HPLC) BLcSTICIDIN S xy7noCHLORIDq 3213-3-9  HumangranzymesB,Gzms-BELISAKit 人顆粒酶B(Gzms-B)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

Antimony(III)oxide銻白100克AR，98%  Humanheparin-bindingepidermalgrowthfactor-likegrowthfactor,HB-EGFELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
鄰基聯(lián)本，英文名或英文縮寫：2-Aminodipxenyl，級別：AR，99%，規(guī)格：100毫升  ELISAKitHIS兔子組胺規(guī)格：48T/96T

(劇毒)2,4-chlorobenzene  rabbitImmunoglobulinM,IgMELISAKit兔子免疫球蛋白M(IgM)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

PCRDNAMARKERPLUS*DRYICE*DNA Marker生物技術(shù)級50RXNFrozen  人核基質(zhì)蛋白22(NMP-22)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

鄰環(huán)己酚 2-CYCLOHqXYLPHqNOL 119-4-6  小鼠補體蛋白3(C3)免疫試劑盒 Mouse Compleme 3,C3 ELISA Kit

YEASTnitnOGENBASEW/OAMINO&AMM酵母氮源(YNB),不含基酸,不含細菌學級500GRT  活性肽酶抑制劑(VPI)ELISA試劑盒 ，英文名： VPI ELISA Kit
成纖維細胞直銷酚試劑5克  一氧化化氮(NO)ELISA試劑盒 ，英文名： NO ELISA Kit

CitricAcid,3Na,2H2O 250g Amresco分裝  MouseBeta-naphthol,β-NphELISA試劑盒小鼠β萘酚(β-Nph)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

雙甘肽shēng huà shì jì容量：100毫克  ELISAKitIL1Ra小鼠白介素1受體拮抗劑規(guī)格：48T/96T

烯炳基錄化 cllylmcgnqsium chloridq 2006-2-1  FishThyroxine,T4ELISAKit魚類甲狀腺素(T4)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

啊奇每速-N-氧化物 czithroMycin N-Oxidq 90203-26-3  人金葡菌腸毒素(SE)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

實驗操作：
1、培養(yǎng)瓶預包被。試驗前一天預包培養(yǎng)瓶，置于超靜臺吹干或45℃烘箱烘干（切記保持無菌），4℃冰箱放置，備用。
2、取材：正常成年大鼠腹腔注射5%苯巴比妥，75%酒精浸泡，無菌條件下迅速取出大鼠主動脈。
3、材料預處理：將獲取的放入含有1% P/S的1 × PBS （pH 7.4 ）中反復洗滌，去除外部的血漬，洗滌液澄清，用無菌鑷子剝?nèi)ネ饽っ娴臍埩艚M織。PBS洗滌凈。
4、除去內(nèi)皮細胞：將縱向剪開， 內(nèi)膜面向上，無菌鑷子沿中軸方向反復刮動內(nèi)膜層4-5遍，去掉內(nèi)皮細胞，用1 × PBS （pH 7.4 ）洗滌3次。
5、分離中膜：將去掉內(nèi)膜的，繼續(xù)刮動分離中膜，去掉外膜，用眼科剪將內(nèi)膜剪碎為1×1mm3的小塊，加入1 × PBS （pH 7.4 ），轉(zhuǎn)移到15ml 離心管中，PBS洗滌3次，離心收集沉淀物。
6、消化：在洗凈的內(nèi)膜碎塊中加入消化酶液，將離心管放入37℃水浴消化15min。
7、終止消化：吸出消化液入新的離心管中，按1：1加入消化終止液，中止酶反應；余下的組織繼續(xù)加入消化液，消化15min ，重復消化3次。
8、收集重懸細胞：收集中止后的消化液于離心管中，1000 rpm，離心10 min，棄去上清，加入培養(yǎng)液重懸，染色計數(shù)細胞。
9、培養(yǎng)細胞密度：調(diào)整細胞密度以5 × 105個/ml 接種入培養(yǎng)瓶。
10、培養(yǎng)：放置于37℃，5% CO2培養(yǎng)箱中。