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公司產(chǎn)品僅用于科研
中文名稱： 肝外膽管上皮細(xì)胞現(xiàn)貨供應(yīng)
簡(jiǎn)稱：肝外膽管上皮細(xì)胞

種屬：

來(lái)源：

培養(yǎng)基：

狀態(tài)：

產(chǎn)品規(guī)格：

單位：

貨號(hào)：AE1246
基本特性：
（ 1 ）組織來(lái)源于正常人肺組織。
（ 2 ）鑒定：肌動(dòng)蛋白， alpha-SMA 和 Desmin 免疫熒光染色。
（ 3 ）原代細(xì)胞培養(yǎng)末期液氮凍存。
（ 4 ）每?jī)龃婀芗?xì)胞數(shù)： 500000cells/1ml 。
（ 5 ）肌動(dòng)蛋白， alpha-SMA 和 Desmin 免疫熒光染色驗(yàn)證。
（ 6 ）不含有 HIV-1 、 HBV 、 HCV 、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。

使用方法：
收到細(xì)胞肝外膽管上皮細(xì)胞現(xiàn)貨供應(yīng)后，請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作。
1. 取出25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置6-8小時(shí)或者過(guò)夜，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2. 待細(xì)胞達(dá)到80%匯合時(shí)準(zhǔn)備進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
3. 細(xì)胞傳代
1) 吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞一次；
2) 添加0.125%胰蛋白酶消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中，37℃溫浴3min左右；倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后吸棄消化液，再加入完全培養(yǎng)液終止消化；
3) 用吸管輕輕吹打混勻，按1:2或1:3等適當(dāng)?shù)谋壤M(jìn)行接種傳代，然后補(bǔ)充新鮮的完全培養(yǎng)基至5mL，放入37℃，5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
4) 待細(xì)胞完全貼壁后，培養(yǎng)觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的完全培養(yǎng)基。

實(shí)驗(yàn)操作：
1、培養(yǎng)瓶預(yù)包被。試驗(yàn)前一天預(yù)包培養(yǎng)瓶，置于超靜臺(tái)吹干或45℃烘箱烘干（切記保持無(wú)菌），4℃冰箱放置，備用。
2、取材：正常成年大鼠腹腔注射5%苯巴比妥，75%酒精浸泡，無(wú)菌條件下迅速取出大鼠主動(dòng)脈。
3、材料預(yù)處理：將獲取的放入含有1% P/S的1 × PBS （pH 7.4 ）中反復(fù)洗滌，去除外部的血漬，洗滌液澄清，用無(wú)菌鑷子剝?nèi)ネ饽っ娴臍埩艚M織。PBS洗滌凈。
4、除去內(nèi)皮細(xì)胞：將縱向剪開(kāi)， 內(nèi)膜面向上，無(wú)菌鑷子沿中軸方向反復(fù)刮動(dòng)內(nèi)膜層4-5遍，去掉內(nèi)皮細(xì)胞，用1 × PBS （pH 7.4 ）洗滌3次。
5、分離中膜：將去掉內(nèi)膜的，繼續(xù)刮動(dòng)分離中膜，去掉外膜，用眼科剪將內(nèi)膜剪碎為1×1mm3的小塊，加入1 × PBS （pH 7.4 ），轉(zhuǎn)移到15ml 離心管中，PBS洗滌3次，離心收集沉淀物。
6、消化：在洗凈的內(nèi)膜碎塊中加入消化酶液，將離心管放入37℃水浴消化15min。
7、終止消化：吸出消化液入新的離心管中，按1：1加入消化終止液，中止酶反應(yīng)；余下的組織繼續(xù)加入消化液，消化15min ，重復(fù)消化3次。
8、收集重懸細(xì)胞：收集中止后的消化液于離心管中，1000 rpm，離心10 min，棄去上清，加入培養(yǎng)液重懸，染色計(jì)數(shù)細(xì)胞。
9、培養(yǎng)細(xì)胞密度：調(diào)整細(xì)胞密度以5 × 105個(gè)/ml 接種入培養(yǎng)瓶。
10、培養(yǎng)：放置于37℃，5% CO2培養(yǎng)箱中。
鹽酸亞脲，英文名或英文縮寫：Guanidine xy7nochloride，級(jí)別：CP，97%，規(guī)格：500克  組織毒1蛋白酶(HIV-1PROTEASE)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒20次

1076-97-71,4-環(huán)已二1,4-Cyclohexanedicarboxylic acid  HumanN-MIDOsteocalcin,N-MID-OTELISAKit人N端中段骨鈣素(N-MID-OT)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

3-PhosphoglycericPhosphokinase3-嶙酸甘油酸激酶25克BR，1u/ul  兔主要組織相容性復(fù)合體Ⅰ類(MHCⅠ/RLAⅠ)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

2-基-4-異1坐啉-3-同 95% 2-Mqthyl-4-Isothiczolin-3-onq 68-0-4  Rat platelet derived growth factor (PDGF) ELISA Kit 大鼠血小板衍生生長(zhǎng)因子(PDGF)ELISA試劑盒

2-AminoisobutyricAcidDL-α-基異5克BR，98%  HumanComplemefragme3c,C3cELISAKit 人補(bǔ)體片段3c(C3c)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
三乙酸shēng huà shì jì容量：保存：-20℃100毫克  HumanAi-proteinase3aibodyIgG,PR3Ab-IgGELISA試劑盒人抗蛋白酶3抗體IgG(PR3Ab-IgG)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

2615-15-8六乙二醇Hexaetxylene glycol  HumanChlamydiapneumoniaeaibody,Cpn-AbELISAKit人衣原體抗體(Cpn-Ab)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

硅酯H-295shēng huà shì jì容量：500毫克  人CX3C趨化因子受體1(CX3CR1)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

乙二醇丁醚 Ethylene glycol butyl ,≥99% 111-76-2 500ML 通用試劑  兔溶菌酶(LZM)免疫試劑盒 Rabbit Lysozyme,LZM ELISA Kit

偶氮脒類引發(fā)劑V59/偶氮二異戊/2,2-偶氮(2-甲基丁)/2,2-偶氮-二-(2-甲基丁)/AMBN/VAZO67 高純，98%，及 100克 國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口  素D2(PGD2)ELISA試劑盒 ，英文名： PGD2 ELISA Kit
嶙酸二氫錳shēng huà shì jì容量：RT10克  ELISAKitH豬促甲狀腺素釋放激素規(guī)格：48T/96T

百里酚酞二鈉絡(luò)合指示劑NA  Humandermato-poin,DPTELISAKit人皮膚蛋白(DPT)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

2′5′-ADP瓊脂糖凝膠4B5KU  人原鈣黏素1(PCDH1)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

四乙二醇二對(duì)磺... Tetraethylene Glycol Di-p-tosylate,97% 37860-51-8 10G 通用試劑  Human noradrenaline bitaas (NE-B) ELISA Kit 人重去甲(NE-B)ELISA試劑盒

乳糖醇 Lcctitol 8102/4/9  HumanBladdeumoraigen,BTAELISAKit 人抗原(BTA)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
肝外膽管上皮細(xì)胞現(xiàn)貨供應(yīng)復(fù)達(dá)欣shēng huà shì jì容量：1米  人Na+/H+交換體3(NHE3)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

10102-25-7litxium sulfate monohydrate  兔乙酰膽堿酯酶(AChE)免疫試劑盒 Rabbit Acetylcholinesterase,ACHE ELISA kit

硫代氧化型輔酶Ishēng huà shì jì容量：25克  切除修復(fù)交叉互補(bǔ)基因1(ERCC1)ELISA試劑盒 ，英文名： ERCC1 ELISA Kit

1--4(氧基... 4-(Trifluoromethoxy)iodobenzene,97% 103962-05-6 1G 通用試劑  RabbitCrosslaps,CrELISA試劑盒兔子骨膠原交聯(lián)(Cr)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

三氧化二銻 Dicntimony trioxidq 1309-64-4  Humanai-livercytosolaibodytype1,LC1ELISA試劑盒人抗肝細(xì)胞胞質(zhì)1型抗體(LC1)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。*天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。產(chǎn)品僅供科研使用
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。